종의 장벽(종간 장벽, Species barrier)은 생물학에서 서로 다른 종 간의 유전적, 생리적, 생태적 요인으로 인해 교배가 이루어지지 않거나, 이루어지더라도 자손이 생존하지 못하거나 생식능력을 가지지 않는 현상을 의미한다. 이 개념은 진화론과 생물 다양성의 이해에 중요한 역할을 한다.

종의 장벽은 주로 두 가지 형태로 나눌 수 있다. 첫 번째는 전세대 장벽로, 이는 두 종이 서로 다른 서식지나 생태적 특성을 갖고 있어 교배가 자연적으로 이루어지지 않는 경우를 뜻한다. 예를 들어, 한 종이 육상에서 주로 서식하는 반면 다른 종이 수중에서 살 경우, 이들은 서로 교배를 시도하지 않기 때문에 전세대 장벽이 발생한다.

두 번째는 사후 장벽으로, 이는 두 종이 교배를 시도하였으나 그 결과로 태어난 자손이 생존하지 않거나 생식능력을 갖지 못하는 경우를 말한다. 이 경우에는 자가 불임(hybrid sterility)이나 하이브리드 붕괴(hybrid breakdown)와 같은 현상이 나타날 수 있다. 예를 들어, 말과 당나귀가 교배하여 노새를 낳을 경우, 노새는 대개 생식능력을 가지지 못해 자연적으로 번식할 수 없다.

종의 장벽은 생명의 다양성 및 진화의 중요한 요소로 작용하며, 이러한 장벽이 존재함으로써 각 종은 개별적으로 적응하고 진화해 나갈 수 있는 기회를 가지게 된다. 이러한 현상은 또한 인간의 생명과학 분야에서 의료, 농업 등 다양한 응용 분야에서도 중요한 고려사항이 된다.